برای اندازه‌گیری روغن در بذر از روش وزنی استفاده شد. در این روش یک گرم بذر وزن می‌گردد و با ۱۸ میلی‌لیتر محلول ان- هگزان و ایزوپروپانول که به‌نسبت حجمی ۳: ۲ با هم مخلوط شده‌اند در یک هاون خرد شده و مخلوط به‌دست آمده توسط کاغذ صافی درون بشری که از قبل وزن شده بود، صاف گردید. سپس هاون و دسته هاون با ۶ میلی‌لیتر محلول ان- هگزان و ایزوپروپانول شستشو داده شده و مجددا صاف می‌گردد. محلول صاف شده پس از تبخیر ان-هگزان و ایزوپروپانول توزین می‌گردد. اختلاف وزن اولیه بشر (بشر خالی) و وزن ثانویه آن مقدار روغن موجود در یگ گرم بذر را نشان می‌دهد. در نهایت مقدار روغن بر حسب میلی‌گرم به‌ازای گرم وزن تر بافت محاسبه گردید.
نکته مهم: نظر به‌اینکه در این روش مقدار روغن برآورد شده برای این گیاهان کم بود بنابراین یک مرحله دیگر به روش بالا اضافه شد. بدین‌صورت که بعد از این که بذر در هاون با محلول ان هگزان- ایزوپروپانول خرد شدند مستقیما به لوله‌های پلی‌اتیلنی منتقل شدند و دیگر عمل صاف‌کردن صورت نگرفت. بعد این لوله‌ها با دور ۱۰۰۰ به‌مدت ۱۰ دقیقه سانتریفیوژ شدند و بعد از سانتریفیوژ فاز بالایی به داخل بشر از قبل وزن شده ریخته شد و عمل تبخیر صورت گرفت و دوباره بشر وزن شد که اختلاف وزن درصد روغن میباشد.
نکته: در مواردی که در عصاره الکلی رنگیزه وجود دارد برای حذف رنگیزه از سولفات‌سدیم استفاده میشود. بدین‌صورت که ۲ گرم از این ماده در ۳۰ میلی‌لیتر آب مقطر حل می‌گردد. بعد از آن به‌ازای هر ۲۴ میلی‌لیتر عصاره الکلی ۱۲ میلی‌لیتر از این ماده اضافه میشود و در قیف جداکننده ریخته میشود. بعد در قیف محکم میشود و برای یک دقیقه تکان داده میشود. در حین کار سر قیف به‌طرف بالا نگهداشته میشود و آرام انتهای آن باز میشود تا گاز تشکیل شده خارج میشود این عمل چندین بار انجام میشود. بعد از یک دقیقه، سر قیف برداشته میشود. رنگیزه‌ها در انتهای قیف با سولفات‌سدیم ته‌نشین می‌گردد که با بازکردن دهانه قیف به‌آرامی از فاز الکلی جدا می‌گردد. ادامه کار مثل بالا است.
منبع:گل و گیاه
دانلود کتاب Double Fertilization: Embryo and Endosperm Development in Flowering Plants
میشود ,وزن ,می‌گردد ,روغن ,قیف ,بذر ,ان هگزان ,بعد از ,مقدار روغن ,محلول ان ,و ایزوپروپانول
درباره این سایت